Полимеразная цепная реакция в реальном времени (ПЦР в реальном времени, qPCR) — это высокоточный метод биологической анализа, который используется для амплификации (увеличения количества) и одновременного количественного измерения ДНК или РНК в образце.
Этот метод позволяет определить наличие и количество конкретных нуклеиновых кислот (генов, генных мутаций, вирусов и др.) в биологическом материале.
Принцип работы ПЦР в реальном времени следующий
- Денатурация. Образец ДНК или РНК нагревается, чтобы разрушить двухцепочечную структуру и получить отдельные цепи.
- Применение праймеров и зонда. К праймерам (коротким олигонуклеотидам, комплементарным к целевой последовательности) добавляется специальный зонд, содержащий флуоресцентный метки и «гашение» (квенчинг) флуоресценции.
- Экстенсия. В присутствии фермента ДНК-полимеразы происходит удлинение праймеров и синтез новых нуклеотидов на целевой последовательности.
- Измерение флуоресценции. Когда ДНК-полимераза достигает метки на зонде, флуоресценция зонда гасится, что приводит к увеличению флуоресценции. Этот процесс называется «пробуждением» (probe-based qPCR) или «синергетическим обменом энергии» (sybr green-based qPCR).
- Измерение в реальном времени. Уровень флуоресценции измеряется на каждом цикле амплификации, что позволяет определить количество целевых нуклеиновых кислот в образце.
ПЦР в реальном времени является мощным инструментом для молекулярной диагностики, исследований генов, определения генных мутаций, выявления инфекций и других приложений. Он обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что делает его полезным для разнообразных областей биологии и медицины.
